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论文类型：期刊论文

发表时间：2007-05-15

发表刊物：中国生物工程杂志

收录刊物：ISTIC、CSCD

卷号：27

期号：5

页面范围：21-27

ISSN号：1671-8135

关键字：磷脂酶A2;PCR 定点突变;固定化金属离子亲和层析;包涵体复性;蛋白表达

摘要：为了确认49位谷氨酰胺磷脂酶A2(glutamine 49 phospholipase A2, Gln49-PLA2)酶活性缺失与氨基酸序列的相关性,对Gln49-PLA2编码基因第49位氨基酸进行PCR定点突变,利用pET32a+质粒载体在大肠杆菌中表达Gln49-磷脂酶A2的突变体--天冬氨酸磷脂酶A2(aspartic acid 49 phospholipase A2, Asp49-PLA2-Q49D-PLA2).将表达的包涵体蛋白变性,采用固定化金属离子亲和层析进行柱上复性、纯化获得突变体融合蛋白(fusion Q49D-PLA2-fQ49D-PLA2);突变体融合蛋白经蛋白水解酶Factor Xa酶切后,采用Hitrap SP阳离子交换层析和Superdex 75凝胶层析进一步纯化,得到突变体蛋白Q49D-PLA2,得率为1.3%,比酶活为72U/mg.从而证实Gln49-PLA2酶活性缺失的关键原因是49位氨基酸为谷氨酰胺.