沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/氧化酶基因克隆及其在大肠杆菌中的表达
Release Time:2019-03-11 Hits:
Indexed by: Journal Article
Date of Publication: 2010-05-30
Journal: 海洋与湖沼
Included Journals: CSCD、ISTIC、PKU
Volume: 41
Issue: 3
Page Number: 315-321
ISSN: 0029-814X
Key Words: 沼泽红假单胞菌;核酮糖-1;5-二磷酸羧化酶/氧化酶(RubisCO);基因克隆;大肠杆菌;重组表达
Abstract: 核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/氧化酶(RubisCO)(EC 4.1.139)是光合细菌通过卡尔文循环固定二氧化碳的关键酶.本文采用PCR方法,从沼泽红假单胞菌株No.9中克隆到RubisCO基因(cbbM)序列(该序列已提交GenBank,登录号:GU061327).采用同源建模法,建立了该RubisCO蛋白的三维结构模型,预测其活性位点.将cbbM基因亚克隆到表达载体pTV118N上,构建表达质粒pTV-CBBM,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达菌株BL21(DE3)/pTV-CBBM,该菌株经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE检测.采用气相色谱法测定破菌上清中的RubisCO酶活.结果表明:①cbbM基因编码461个氨基酸,与沼泽红假单胞菌株DCP3和DH1的RubisCO蛋白序列相似性分别为98%和99%;②推测沼泽红假单胞菌No.9中RubisCO蛋白的活性中心由Asn112、Lys192、Asp194、Glu195、His288、Arg289、His322、Gly424、Ser369、Gly370和Gly394等氨基酸残基组成;③重组蛋白分子量约为50kDa左右,与预测相符;④破菌上清中的RubisCO酶比活高于原始菌株中的酶活,说明目的基因在大肠杆菌中得到了有效表达.