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论文类型：期刊论文

发表时间：2012-01-01

发表刊物：大连理工大学学报

收录刊物：Scopus、EI、PKU、ISTIC、CSCD

卷号：52

期号：6

页面范围：803-808

关键字：宏基因组DNA; 活性污泥; 单因素法; 表面响应法

摘要：宏基因组DNA的成功获取是宏基因组学技术顺利开展的关键.利用溶菌酶-SDS-蛋白酶K法(LSK法)提取活性污泥宏基因组DNA,结合单因素法与表面
   响应法对提取过程的4个关键步骤进行条件优化,即预处理、细胞裂解、蛋白去除及DNA沉淀过程.确定影响DNA产量的重要因素:预处理缓冲溶液与DNA沉
   淀剂类型、CTAB质量分数、溶菌酶浓度、37℃水浴时间及SDS质量分数.确定LSK法提取宏基因组DNA的最佳条件:TENC预处理活性污泥;1.5
   %CTAB;0.5mg/mL溶菌酶,37℃水浴1.4h;2%SDS,200mug/mL蛋白酶,55℃水浴2.5h;异丙醇沉淀DNA
   40min.在最佳条件下,活性污泥宏基因组DNA的最大产量为每g污泥170mug.本研究可为环境样品中高质量宏基因组DNA的提取提供有价值的参考
   .