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论文类型：会议论文

发表时间：2008-10-01

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关键字：醛还原酶 丙二醇 基因克隆 基因表达 克雷伯氏菌 重组质粒

摘要：以克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增得到醛还原酶的基因yqhD。将其连接到pMD 18-T载体上,得到重组质粒pMD18-T-yqhD,对此重组质粒进行序列测定,对其DNA序列分析表明，该基因长度为1164 bp,编码387个氨基酸,与Genbank上已公布的Klebsiella pneumoniae MGh78578中yqhD相比，氨基酸序列的同源性为100％。将yqhD基因连接到表达载体pET23a(+)上,转化E.coli BL21(DE3),得到重组E.coli BL21(DE3)(pET23a(+)-yqhD)。经SDS-PAGE分析表明,该酶在E.coli BL21(DE3)中得到了高水平表达,亚基的分子量为42.3 kD,且表达的目的蛋白胞内可溶。20 ℃条件下诱导12h,以3-羟基丙醛为底物,测得的粗酶比活力为1.25 U/mg,而以1,3-PD为底物时,检测不到酶活力。