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论文类型：期刊论文

发表时间：2003-05-25

发表刊物：中国生物制品学杂志

收录刊物：ISTIC、CSCD

卷号：16

期号：3

页面范围：161-164

ISSN号：1004-5503

关键字：基因治疗 大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶 血栓 淋巴细胞

摘要：目的构建大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶(Gloshedobin,GSB)基因真核表达载体,试图借助于IL-2的分泌通路,使GSB分泌至胞外而达到溶栓和防栓的目的.方法应用PCR重组技术,将GSB的5'端和3'端分别与IL-2基因的信号肽和poly A尾相连接,将此重组基因克隆入逆转录病毒载体pLNCX,以脂质体介导转染人外周血淋巴细胞,并以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因检测转染效率、确定DNA和脂质体的比例.转染24h后从mR-NA、DNA和蛋白质水平检测GSB的表达情况.结果mRNA和DNA水平均有外源基因GSB的表达;SDS-PAGE显示在相对分子质量30000左右出现一条带,且转染上清具有精氨酸酯酶活性.结论构建的真核表达载体可表达具有活性的GSB,为GSB基因治疗血栓的体内研究打下基础.