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Indexed by:期刊论文
Date of Publication:2002-06-01
Journal:生物化学与生物物理进展
Included Journals:Scopus、SCIE、PKU、ISTIC、CSCD
Volume:29
Issue:3
Page Number:390-393
ISSN No.:1000-3282
Key Words:类凝血酶;克隆;表达;纯化;特性表征
Abstract:根据同源性分析设计引物,通过RT-PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因,之后将该基因克隆到表达载体pPIC9K中,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中.经筛选得到甲醇快速生长型转化子His+Mut+在500 ml摇瓶中培养,甲醇诱导分泌表达.上清液中重组类凝血酶是通过两步柱层析得到:Q Sepharose FF和Benzamidine-Sepharose 4BCL.与天然蛇毒类凝血酶一致,分泌表达的重组类凝血酶具有较强的酯酶活性,但精氨酸甲酯如TAME的水解活性较弱.此重组类凝血酶在37℃中性溶液中保存过夜将分解成小肽,但在0℃下很稳定.该酶的最适pH为8.0.
