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论文类型：期刊论文

发表时间：2016-05-25

发表刊物：园艺学报

收录刊物：PKU、ISTIC、CSCD、Scopus

卷号：43

期号：5

页面范围：998-1004

ISSN号：0513-353X

关键字：百合 百合无症病毒 16 kD 基因克隆 原核表达 抗血清制备 lily Lily symptomless virus 16 kD gene clone prokaryotic expression antiserum preparation

摘要：以感染百合无症病毒(LSV)的百合叶片为试材,克隆LSV16 kD基因,连接到原核表达载体pET-28a(+)上.将获得的重组质粒pET-28a(+)+16 kD转化大肠杆菌BL21 (DE3),经IPTG诱导得到了高效表达的16kD蛋白,融合蛋白分子量约为20 kD.融合蛋白经过镍柱纯化后作为抗原免疫注射小鼠,制备得到16kD蛋白抗血清.Western blot分析显示所制备的抗血清与诱导表达的融合蛋白发生特异性反应;通过ELISA检测和RT-PCR检测百合样品,证实制备的抗血清与LSV侵染的百合叶片发生了相同的特异性反应.结果表明,目的蛋白表达成功,所制备的抗血清具有特异性,可用于LSV的快速检测、免疫组织化学以及16kD蛋白功能研究.