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Indexed by:会议论文

Date of Publication:2015-10-21

Page Number:51-52

Key Words:致病性大肠杆菌 MRT-PCR HGMF

Abstract:大肠杆菌(Escherichia coli)具有致病性,常引起严重腹泻和败血症.传统的单菌分离方法,即把样品的菌液涂在平板琼脂培养基上,待细菌培养形成单菌落后,从外观和形状很难判断出致病性大肠杆菌.本研究旨在提供一种新型高效的致病性大肠杆菌的筛选方法,以期为后续研究提供基础.本研究将多重实时荧光定量聚合酶链式反应(multiplex real-time PCR,MRT-PCR)和新型疏水网格滤膜技术(high gradient magnetic filtration,HGMF)结合,将MRT-PCR阳性样品的稀释液涂于HGMF膜上过滤培养并复制菌落.复制后的HGMF膜经过酶解等处理后,与异羟基洋地黄毒甙元(Digoxigenin,Dig)标记的大肠杆菌的致病基因的探针进行杂交,显色反应后致病性大肠杆菌所在的格子便显现出紫色.通过与原HGMF进行对照,便能从原HGMF上找到所对应的格子,其中的菌落便含有需要分离的大肠杆菌.结果表明,74.5％的致病性大肠杆菌从样品中分离出来,而使用传统的单菌落分离方法只得到26.3％的分离率.尤其在致病性大肠杆菌含量较低时,HGMF菌落杂交方法体现出了特别显著的分离效果：51.8％的产肠毒性大肠杆菌和产志贺毒素大肠杆菌被分离出来,而传统分离方法只有4.5％的分离率.新型HGMF菌落杂交方法能够高效准确的分离已知所有病原性的致病性大肠杆菌,不仅可以用于食物等样品中的致病性大肠杆菌分离,更可广泛应用到菌落分离的各个领域.为食品安全的调查和研究带来极大的便利.