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论文类型：期刊论文

发表时间：2014-05-21

发表刊物：微生物学通报

收录刊物：PKU、ISTIC、CSCD

卷号：41

期号：11

页面范围：2198-2207

ISSN号：0253-2654

关键字：蛋白酶K;密码子优化;表达条件优化;分离纯化

摘要：[目的]提高蛋白酶K在毕赤酵母中的表达产量,建立分离纯化方法.[方法]首先对蛋白酶K密码子进行优化,将其导入毕赤酵母GS115中实现分泌表达.然后对甲醇浓度、发酵温度和pH等表达条件进行优化,再对硫酸铵沉淀、亲和层析等纯化工艺进行比对分析.[结果]蛋白酶K密码子优化后实现了在毕赤酵母中的高效表达.在甲醇量0.75％、温度25℃和pH 7.0条件下进行发酵罐培养,蛋白酶K表达量达到2.2 g/L.采用Ni-NTA亲和柱对发酵液进行纯化可以得到较好的纯化效果.[结论]密码子优化后的蛋白酶K在毕赤酵母中高效表达并可以利用Ni-NTA亲和柱进行有效分离纯化.