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论文类型：会议论文

发表时间：2008-10-18

页面范围：1-16

关键字：重组水蛭素;SC-mPEG;体外抗凝活力;分子动力学;模拟预测;聚乙二醇

摘要：目的：水蛭素因血浆半衰期短而严重限制了其临床应用，聚乙二醇修饰能有效地延长其半衰期。本文通过比较不同修饰位点、修饰方法所得单修饰产物的比率、纯度及其活性保留率，从而得到修饰专一性强且活性保留率较高的修饰策略。
    方法：采用液相和固相修饰方法,用琥珀酰亚胺活化的PEG 20kDa分别在pH6.0、8.0的条件下对水蛭素的His和Lys进行定点修饰；用SDS-PAGE分析产物的修饰度，并用离子交换柱对修饰后的产物进行分离，然后用凝血酶滴定法测定水蛭素单修饰产物的体外抗凝活性。另外用分子动力学模拟方法预测了pH8.0条件下PEG修饰的位点。
    结果：在pH6.0、8.0的条件下，水蛭素单修饰率都高达90％以上，但二者的单修饰活性保留率相差较大。在pH6.0时，液、固相单修饰活性保留率为34％、34.8％；而在pH8.0时分别为55％、96％。
    结论：在pH8.0条件下，采用“离子交换柱辅助”固相修饰的方法对Lys进行定点修饰能得到较高产率和较高活性保留率的单修饰产物。