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论文类型：期刊论文

发表时间：2015-01-15

发表刊物：生物工程学报

收录刊物：Scopus、PKU、ISTIC、CSCD

卷号：31

期号：5

页面范围：670-681

ISSN号：1000-3061

关键字：马克斯克鲁维;菊粉酶;重组表达;分离纯化;酶学性质

摘要：为进一步提高菊粉酶在生物技术领域的应用,研究了来源于马克斯克鲁维酵母Kluyveromyces marxianus YX01的菊粉酶性质.通过在毕赤酵母GS115宿主细胞中异源表达该菊粉酶基因(inu),获得了一种外切型菊粉酶,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证其分子量为86.0 kDa.进一步在该菊粉酶上增加6个His标签,采用聚乙二醇(PEG) 20 000透析浓缩和Ni-NTA Agarose静态亲和吸附作用的方法,完成菊粉酶的分离纯化,纯化倍数和酶回收率分别为3.6和33.1％.比较发现粗酶液与纯酶的酶学性质相似,且菊粉酶的最适反应温度为60℃,最适pH值为4.62,并测得该酶的Km和Vmax值,以菊粉为底物时,Km和Vmax值分别为80.53 g/L和4.49 g/(L·min);以蔗糖底物时,Km和Vmax值分别为183.10 g/L和20.20 g/(L·min).金属离子Mn2+、Ca2+、Cu2+、Zn2+和Fe2+对酶活力具有不同程度的抑制作用,其中Cu2+、Zn2+和Fe2+的抑制作用最为显著.这些研究为进一步提高菊粉酶在工业化的应用奠定了基础.