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论文类型：期刊论文

发表时间：2015-06-02

发表刊物：微生物学通报

收录刊物：PKU、ISTIC、CSCD

卷号：43

期号：2

页面范围：292-300

ISSN号：0253-2654

关键字：密码子优化;柞蚕溶菌酶;毕赤酵母;抑菌作用

摘要：[目的]提高柞蚕溶菌酶在毕赤酵母中的表达量,对柞蚕溶菌酶活性进行测定.[方法]根据毕赤酵母密码子偏爱性对柞蚕溶菌酶基因进行优化,并在目的基因3'端加上6个组氨酸标签,优化后的基因克隆至表达pPIC9K载体中,并通过电转化的方法导入毕赤酵母GS115中.利用不同浓度梯度的G418进行高拷贝转化子的筛选,经甲醇诱导实现分泌表达.通过硫酸铵盐析、镍柱亲和层析等工艺分离纯化柞蚕溶菌酶,利用琼脂扩散方法测定柞蚕溶菌酶对溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、苍白杆菌及过氧化醋杆菌的抑菌作用,利用比浊法测定酶活大小.[结果]密码子优化后的柞蚕溶菌酶在诱导温度25℃、甲醇量0.75％和pH 7.0条件下实现了最高表达,表达量达到了2.4 g/L,并且纯化后的柞蚕溶菌酶酶活达到23 970 U/mg.[结论]密码子优化后的柞蚕溶菌酶在毕赤酵母中实现了高效表达,纯化后的柞蚕溶菌酶对溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、苍白杆菌及过氧化醋杆菌均有抑菌作用.