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论文类型：期刊论文

发表时间：2002-06-10

发表刊物：中国生物化学与分子生物学报

收录刊物：ISTIC、CSCD

卷号：18

期号：3

页面范围：287-292

ISSN号：1007-7626

关键字：小肽多拷贝基因,定向插入,表达载体,EcoT14 Ⅰ,高效表达 multiple copies peptide gene unidirectional insertion high-level expression EcoT14 Ⅰ

摘要：介绍一种快速、高效构建小肽多拷贝基因表达载体的策略,并构建了相应的表达载体pETE-coT.用人工合成的编码28个氨基酸残基的胸腺素α1基因为模型,采用限制酶EcoT14I识别序列CCAAGG为小肽基因两末端序列,利用其酶切后可产生非镜相对称粘性末端,一次连接反应就构建出一系列不同基因拷贝数的表达载体;在小肽基因两端分别引进编码Factor Xa和羟胺蛋白切割位点的序列,表达出的融合蛋白可被Factor Xa和羟胺剪切出不残留任何外源氨基酸的小肽.不同拷贝数的小肽融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中均获得高效表达.