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Indexed by:会议论文

Date of Publication:2008-10-01

Page Number:1-5

Key Words:1,3-丙二醇 氧化还原酶 辅酶特异性 定点突变 克雷伯氏菌 蛋白表达 微生物发酵法

Abstract:以克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)基因组为模板扩增出编码1,3-PDOR的基因dhaT,酶切后连接到载体 pET23a(+),以该重组载体为模板进行引物重叠延伸定点突变,获得含有突变基因的重组载体。以大肠杆菌DH5α为克隆宿主进行基因扩增,以大肠杆菌BL21(DE3)为表达宿主进行蛋白表达。表达产物经纯化后达到了电泳级纯度。酶活测定显示,突变酶分别以NADH和NADPH为辅酶时比酶活为629.38 Umg-1和277.35 Umg-1,而原始酶分别为706.90 Umg-1和20.95 Umg-1。