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发布时间：2019-03-10

论文类型：期刊论文

发表时间：2016-11-26

发表刊物：生物技术通报

收录刊物：CSCD、ISTIC、PKU

卷号：32

期号：11

页面范围：194-201

ISSN号：1002-5464

关键字：可溶性表达;包涵体;蛋白纯化;蛋白复性;有活性的蛋白

摘要：旨在将来源于鸡的金黄色葡萄球菌单链抗体（scFv）进行原核诱导表达，获得有抗体活性的目的蛋白。构建含有目的抗体基因的重组质粒，将此质粒进行原核诱导表达并鉴定所获得蛋白的生物活性。结果显示，（1）成功构建了含有金黄色葡萄球菌单链抗体（scFv）的重组质粒 pCold I-scFv，质粒成功转化到大肠杆菌表达菌株中；（2）经过诱导表达后，目的蛋白主要以包涵体的形式存在于沉淀中；（3）使用4 mol/L 尿素成功地将包涵体变性溶出；（4）通过柱层析法及透析法获得了纯化及复性效果较好的目的蛋白；（5）间接 ELISA 鉴定证实所获蛋白具有金黄色葡糖球菌抗体活性。通过质粒构建及原核诱导表达、包涵体溶出和复性等步骤，最终获得了有金黄色葡萄球菌抗体活性的目的蛋白。