Title of Paper:蛇毒类凝血酶基因在大肠杆菌中的融合表达及纯化

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Date of Publication:2003-03-30

Journal:无锡轻工大学学报

Included Journals:CSCD

Volume:22

Issue:2

Page Number:22-25

ISSN No.:1673-1689

Key Words:类凝血酶 固定化金属亲和层析 融合表达 大肠杆菌

Abstract:将大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶(G1oshedobin)基因克隆到载体pET32-a(+)上,在T7lac启动子下以N端融合硫氧还蛋白的形式在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,诱导条件为:30℃诱导6 h,IPTG浓度为1 mmol/L.利用固定化金属离子(Ni2+)亲和层析分别对胞内可溶物和变性条件下的包涵体进行纯化.通过SDS-PAGE检测融合蛋白的纯度,采用点杂交和纤维蛋白凝结活性检测分析,显示纯化产物具有较高生物活性.